Набор для выявления антител к вирусу инфекционного бронхита кур

Вирус инфекционного бронхита птиц

Инфекционный бронхит (ИБ) — высококонтагиозная болезнь, проявляющаяся у цыплят респираторным и уремическим синдромом, а у кур — поражением герминативных органов и снижением яйценоскости.

Заболевание распространено во всех странах с развитым промышленным птицеводством. Наносит огромный экономический ущерб, заключающийся в снижении мясной и яичной продуктивности на 50—60 %, гибели цыплят первого месяца жизни до 30 %, выбраковке до 60 % птицы при хроническом течении болезни с осложнениями бактериальными инфекциями.

В естественных условиях восприимчивы куры всех возрастных групп; наиболее подвержены заболеванию цыплята до 30-дневного возраста. Человек переболевает с легкими признаками поражения верхних дыхательных путей.

Характеристика возбудителя. Возбудитель ИБ — РНК-содержащий вирус, относящийся к семейству Coronaviridae. Вирионы его изометрической формы, размером 70—120 нм, заключены в суперкапсидную оболочку с редкими булавовидными выступами, напоминающими солнечную корону.

Все штаммы вируса ИБ очень чувствительны к УФ-облучению, в течение трех минут обезвреживаются 1%-ными растворами фенола, крезола, формалина, 70%-ным раствором этилового спирта. В аллантоисной жидкости при минус 25 °С сохраняют активность до 537 дней.

Антигенная вариабельность. Вирусу присуща значительная антигенная вариабельность. Определены 7 серотипов. Выделенные в нашей стране штаммы относятся к серотипам Массачусетс и Коннектикут. Выделение полевых изолятов, отличающихся по антигенному составу от этих серотипов, вынуждает вести работу по созданию новой вакцины.

Антигенная структура. Белки вируса различаются по тканевому тропизму. Патогенность штаммов вируса связана с изоэлектрическими точками их белков. Классификация белков на основе изоэлектрических точек позволяет идентифицировать высокопатогенные и персистентные штаммы. На поверхности вируса обнаружено пять агглютининов: А, В, С, D, Е, из которых первые четыре ответственны за нейтрализацию вируса.

Из 16 моноклональных антител все реагировали с белками пепломеров, а один тип антител нейтрализовал инфекционность и подавлял гемагглютинирующую активность вируса.

Антигенная активность. Переболевание птицы сопровождается образованием антигемагглютинирующих, вируснейтрализующих антител и практически пожизненным иммунитетом к гомологичному типу вируса. У кур-реконвалисцентов вируснейтрализующие антитела обнаруживались 482 дня. Преципитирующие антитела появлялись в сыворотке крови через 2—3 нед, но исчезали раньше, чем вируснейтрализующие антитела. В крови кур-реконвалисцентов найдены комплементсвязывающие антитела.

Культивирование вируса. Вирус удается культивировать на куриных эмбрионах при заражении в аллантоисную полость, амнион или на ХАО. Признаки размножения вируса в курином эмбрионе — «эффект карликовости» (замедление роста), мумификация, шарообразная форма зародыша и гибель на 3—6-й день после заражения. Значительное количество штаммов вируса размножается в культуре клеток куриного эмбриона и ВНК-21 с образованием ЦПД.

Гемагглютинирующая активность. У большинства штаммов вируса ИБ она не наблюдается. Штамм Коннектикут способен агглютинировать эритроциты кур, штамм же Массачусетс проявляет такую активность только после обработки трипсином или фосфолипазой С.

Клинические признаки. Отмечают три клинических синдрома болезни: респираторный, нефрозо-нефритный и репродуктивный.

Респираторный синдром проявляется чаще у цыплят до 1-месячного возраста и характеризуется кашлем, трахеальными хрипами, носовыми истечениями, затрудненным дыханием, конъюнктивитом, синуситом и высокой летальностью. У цыплят 1—2-месячного возраста болезнь протекает хронически с колибактериозом и микоплазмозом.

Нефрозо-нефритный синдром наблюдают у цыплят до 2-недельного возраста при заражении их нефротропными штаммами вируса. Появляется диарея, гибнет до 70 % цыплят.

Репродуктивный синдром регистрируют обычно у кур старше 6 мес; характеризуется резким снижением яйценоскости, неправильной формой скорлупы яиц. У 20—25 % кур-несушек, переболевших ИБ в раннем возрасте, отмечают недоразвитость яйцевых фолликул.

Патологоанатомические изменения. При вскрытии обнаруживают серозный катаральный и казеозный экссудат в трахее и бронхах (при респираторном синдроме), поражение почек и мочеточников (при нефрозо-нефритном синдроме), недоразвитость яйцевых фолликулов (при репродуктивном синдроме).

Локализация вируса. В первые две недели болезни вирус адсорбируется на клетках слизистых оболочек респираторного тракта и размножается в них. Развитие инфекционного процесса сопровождается виремией с локализацией вируса в лейкоцитах и эритроцитах в течение нескольких недель после заражения. С кровью вирус попадает в почки, легкие, яичники и яйцеводы, в клетках которых размножается и вызывает патологический процесс. Удается обнаружить его также в селезенке (до 49 дней), в почках (до 35 дней), в клоаке (до 45 дней).

Выделяется вирус с истечениями из глаз и носа, а также с фекалиями, у петухов — со спермой в течение 20 дней после заражения. С содержимым яиц от больных кур вирус выделяется до 6 недель после их заражения.

Источник инфекции. Основной источник инфекции — больные и переболевшие цыплята и куры. Выздоровевшие птицы остаются вирусоносителями, а хозяйство ряд лет считается неблагополучным по заболеванию. Вирус передается аэрогенно, алиментарно, прямым и непрямым контактом, а также трансовариально.

Диагностика. Диагноз ставят на основании эпизоотологических данных, клинических признаков болезни, патологоанатомических изменений и лабораторных исследований.

Лабораторная диагностика. Патологическим материалом для лабораторных исследований служат смывы с гортани, трахеи от больных птиц и соскобы от трупов, кусочки легких, почек, а от взрослой птицы — почки и яйцеводы.

Обнаружение вирусной нуклеиновой кислоты в патологическом материале проводят с помощью ПЦР. Антиген вируса можно быстро обнаружить в РДП и РИФ. Использование в РИФ группоспецифических моноклональных антител или гипериммунной сыворотки позволяет сразу же провести серотипизацию.

Активный вирус ИБ обнаруживают биопробой. Наиболее результативно проведение ее на цыплятах 10—25-дневного возраста из хозяйств, благополучных по респираторным болезням. Суспензией, полученной из патологического материала, заражают цыплят интратрахеально и через 1—5 дней наблюдают появление респираторных симптомов и патологоанатомических изменений, характерных для ИБ.

Для постановки биопробы на 8—10-дневных куриных эмбрионах необходимо провести 6—8 «слепых» пассажей. В процессе пассирования полевой изолят вируса адаптируется к куриным эмбрионам, и на них начинают проявляться типичные для ИБ патологические изменения. Культуру клеток для биопробы не используют, так как в ней вирус может вызвать ЦДП только после адаптации к куриным эмбрионам.

Идентификация. Материал, полученный в результате биопробы, содержит вирус, который необходимо идентифицировать в РДП, PHГА и РИФ, а типовую принадлежность определяют в PH на куриных эмбрионах и в РТГА.

Быстрее поставить диагноз позволяют серологические исследования.

Серодиагностика основана на выявлении у больных и переболевших птиц антител в PH, РНГА и ИФА. Причем если PH определяет накопление антител в организме в период с 10-го по 36-й день болезни, то РНГА — со 2-го по 14-й день, ИФА — с 3-го дня.

Установлено, что серологические данные не позволяют судить о резистентности конкретного поголовья птиц к заражению вирусом ИБ, так как не всегда уровень антител коррелирует с резистентностью. В последнем случае важную роль играет местный тканевый иммунитет респираторного трахеита.

Дифференциальная диагностика. Следует учитывать, что ИБ сходен с инфекционным ларинготрахеитом, ньюкаслской болезнью и гриппом птиц. Дифференциальную диагностику этих заболеваний проводят лабораторными методами.

Иммунитет и специфическая профилактика. Переболевшая птица резистентна к заражению гомологичным штаммом вируса в течение 3—6 мес. Трудность обеспечения специфической профилактики инфекционного бронхита кур обусловлена большой антигенной и иммунологической вариабельностью полевых штаммов вируса.

Для профилактики инфекции применяют как живые, так и инактивированные вакцины. Материнские антитела от иммунных кур-несушек передаются через яйцо цыплятам и защищают их в первые 2—4 нед жизни. Наиболее выраженный иммунный ответ получен при вакцинации в 3—4-недельном возрасте живой вакциной, а в 16-недельном — инактивированной. Учитывая факт образования местного тканевого иммунитета в респираторном тракте, живые вакцины применяют орально (с питьевой водой) или путем закапывания в нос.

Использованные источники: www.activestudy.info

СТАТЬИ ПО ТЕМЕ:

  Щадящий антибиотик от бронхита

  Прогревание легких при бронхите

  Отварная картошка при бронхите

АВИВАК

+7 (495) 785 18 01

+7 (812) 677 38 80

АВИВАК-ИФА-ИБК

Набор для выявления антител к вирусу инфекционного бронхита кур (ИБК) методом иммуноферментным анализом (ИФА)

Общие сведения

В состав набора входят иммуноспецифические и химические компоненты:

— полистироловые 96-луночные микропанели с адсорбированными в лунках инактивированным антигеном: ИБК — по 2 микропанели;

— буфер для разведения испытуемых и контрольных проб;

— стандарт — (сыворотка крови кур с повышенным содержанием специфических антител к антигену ИБК);

— положительный контроль (сыворотка крови кур, содержащая специфические антитела к антигену ИБК);

— отрицательный контроль (сыворотка крови кур, не содержащая специфических антител к антигену ИБК);

— антивидовой конъюгат (антитела к IgG кур, меченые щелочной фосфатазой);

Набор рассчитан на анализ 88 испытуемых проб на каждой микропанели. Компоновка набора допускает возможность дробного использования компонентов для проведения нескольких исследований по мере поступления биологического материала.

Для исследования используют индивидуальные сыворотки крови птиц без признаков гемолиза и бактериальной контаминации объемом 0,3–0,5 см 3 .

Следует помнить, что ИФА является высокочувствительным методом, поэтому ошибки, связанные с подготовкой образцов, проведением инкубационного, температурного и промывочного режимов могут быть причиной получения недостоверных результатов.

Перед началом работы микропанели и все компоненты набора выдерживают 20–30 мин при температуре 22-27°С. Не использованные реагенты убирают в холодильник (2 — 8°С) сразу же после проведения исследования.

Принцип метода

Вирусный антиген, адсорбированный в лунках полистироловой микропанели, связывается со специфическими антителами, присутствующими в сыворотке крови, в результате чего формируется комплекс антиген-антитело. Полученный иммунный комплекс выявляется после взаимодействия с антивидовым конъюгатом (антитела к IgGкур, меченые щелочной фосфатазой), фермент которого, после добавления субстрата, вызывает разложение субстрат- индикаторного раствора и образование растворимого окрашенного продукта. При этом интенсивность окраски раствора в лунке микропанели пропорциональна содержанию антител в исследуемом материале.

Порядок применения

Приготовление рабочих растворов

Буфер для разведения проб. Концентрированный раствор буфера разводят в 4 раза дистиллированной или деионизованной водой.

Промывочный буфер. Концентрированный раствор буфера разводят в 20 раз дистиллированной или деионизованной водой.

Коньюгат, субстратный раствор и стоп-раствор — готовы к употреблению.

Подготовка испытуемых сывороток и контрольных проб

Все испытуемые сыворотки, стандарт, положительный и отрицательный контроли разводят в соотношении 1:400 буфером для разведения проб, используя для каждого образца новый наконечник.

В лунки микропанели в двух повторах вносят по 100 мкл приготовленных контрольных проб: буфер для разведения проб, отрицательный контроль, положительный контроль, стандарт.

В остальные лунки микропанели вносят по 100 мкл приготовленных в разведении 1:400 испытуемых проб сыворотки крови и инкубируют 30 мин при температуре 20-30°С.

После инкубации лунки освобождают от содержимого резким встряхиванием и трижды промывают промывочным буфером (по 300 мкл в каждую лунку), каждый раз выдерживая лунки с буфером не менее 30 сек. При этом не рекомендуется оставлять лунки сухими в промежутках между промывками. Затем жидкость окончательно удаляют, микропанель подсушивают постукиванием по сложенной в несколько слоев фильтровальной бумаге.

Затем в лунки микропанели вносят по 100 мкл конъюгата и выдерживают 30 мин при температуре 20-30°С.

После инкубации проводят процедуру промывания лунок.

Далее в используемые лунки микропанели вносят по 100 мкл субстрата и выдерживают 30 мин при температуре 20-30°С.

После чего реакцию останавливают, добавляя в каждую используемую лунку по 100 мкл стоп-раствора.

Сразу же после остановки реакции проводят измерение оптической плотности (О.П.) раствора в каждой лунке на спектрофотометре (ридер) с вертикальным лучом света при длине волны 405 нм и осуществляют оценку реакции с помощью компьютерной программы «ИФА-АВИВАК».

Условия и срок хранения

Срок годности компонентов набора — 12 месяцев от даты изготовления при хранении их в защищенном от света месте при температуре от 2 до 8°С.

Использованные источники: www.avivac.com

ЧИТАЙТЕ ТАК ЖЕ:

  При бронхите от кашля болит голова

  Чем лечить остатки кашля при бронхите

  Признаки заболевания бронхитом у взрослых

  Антибиотик при бронхите у взрослых азитромицин

  Как часто нужно делать ингаляцию при бронхите с физраствором

НАБОР ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ ИНФЕКЦИОННОГО БРОНХИТА КУР (ИБК) ИММУНОФЕРМЕНТНЫМ МЕТОДОМ

Внимание! Этот справочник доступен на CD. Подробная информация обо всех препаратах, удобный поиск, автоматическое обновление каталога. Подробнее »»

Адрес: 600901, г. Владимир, мкр. Юрьевец.
Тел.: (4922) 26-06-14
Тел./факс: (4922) 26-38-77
E-mail: mail@arriah.ru

По вопросам размещения информации

о ветеринарных препаратах и кормовых добавках

Использованные источники: www.vettorg.net